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標題: 水產養(yǎng)殖戶弧菌實用檢測方法及實驗器材試劑 [打印本頁]
作者: flyjet 時間: 2018-1-5 16:33
標題: 水產養(yǎng)殖戶弧菌實用檢測方法及實驗器材試劑
水產養(yǎng)殖戶弧菌實用檢測方法及實驗器材試劑
一、弧菌檢測器材和試劑 (水產養(yǎng)殖戶簡易實驗室用）
電爐一臺、
天平（0.1克）1個、
一次性無菌培養(yǎng)皿（90mm）10個、
100ml量筒1個、
三角燒瓶500ml1個、
250ml燒杯1個、
無菌巴氏滴管若干 支 或移液槍一支（配套無菌吸頭）
酒精燈1個、
酒精1瓶、
三角涂布棒1個或無菌L型涂布棒、
玻璃棒1支 、
TCBS培養(yǎng)基1瓶、 (北京陸橋產，貨號CM402)
無菌采樣瓶若干（按采樣數(shù)）、
接種環(huán) 1支 或一次性無菌接種環(huán)、
小型恒溫培養(yǎng)箱 1臺
二、樣品采集
1、用無菌采樣瓶采集水下約20cm處水樣，采好的水樣需蓋緊瓶。
2、采得的水樣立即送檢，否則，應將樣品置于冰瓶或冰箱中，但也不得超過24h，否則將影響檢驗結果。
三、檢驗步驟
1、培養(yǎng)基稱量煮沸倒平板
1） 稱量8.91克TCBS瓊脂粉（可按比例增減）和100ml蒸餾水或純凈水（沒有條件的用冷卻開水或桶裝水），倒入洗凈的三角燒杯中，加熱攪拌，溶解瓊脂粉，直至沸騰。
培養(yǎng)基溶解判定標準：輕搖三角瓶，掛在瓶壁上的液體里沒有顆粒，即為全部溶解。難溶解的顆粒為瓊脂，顆粒溶解不充分的話，制作的培養(yǎng)平板易破，不耐用。
2）在滅菌操作臺上，將沸騰后的培養(yǎng)基冷卻到50~60℃，分別倒入一次性無菌培養(yǎng)皿中，每個培養(yǎng)皿約15~20mL，待其冷卻凝固，倒置于超凈工作臺或無菌泡沫箱內保存?zhèn)溆谩?
注意：倒好的平板內不能有水珠或水層。 ，如平板表面有水珠，可放在25 ℃～50 ℃的培養(yǎng)箱里干燥，直到平板表面的水珠消失。
2、菌液接種
在滅菌操作臺上，用無菌巴氏滴管或（無菌槍頭）取水樣（可稀釋）0.05mL（2~3ml無菌巴氏滴管一滴約50微升），滴入制好的培養(yǎng)皿培養(yǎng)基上，用滅菌的三角涂布棒將菌液涂抹均勻，平放于操作臺上數(shù)分鐘，使菌液滲入培養(yǎng)基。 （沒有超凈工作臺的，應選相對潔凈的環(huán)境，現(xiàn)用現(xiàn)配，在火焰旁操作。）
3、弧菌培養(yǎng)
將接種培養(yǎng)皿倒置恒溫培養(yǎng)箱箱內培養(yǎng)，于36 ℃±1 ℃培養(yǎng)18 h～24 h左右，取出計數(shù)菌落。在通常情況下，涂布后，將平板靜置 10 min，如樣液不易吸收，可將平板放在培養(yǎng)箱 36 ℃±1℃培養(yǎng)1 h；等樣品勻液吸收后翻轉平皿，倒置于培養(yǎng)箱，
如不是在恒溫培養(yǎng)箱用37℃培養(yǎng)，在室溫環(huán)境培養(yǎng)，由于室溫溫差的原因會嚴重影響弧菌菌落形成的數(shù)量和時間。
4、菌落計數(shù)
分別點數(shù)綠色菌落和黃色菌落數(shù)量，乘取水樣的稀釋倍數(shù)，即可得該水樣的綠色和黃色弧菌總數(shù)。
典型的副溶血性弧菌在TCBS 上呈圓形、半透明、表面光滑的綠色菌落，用接種環(huán)輕觸，有類似口香糖的質感，直徑2 mm～3 mm。
注意：選用TCBS作為分離培養(yǎng)各種弧菌的培養(yǎng)基，特異性不是很強；不少細菌在TCBS上也能生長，但生長較慢，需要培養(yǎng)24h后方可長成0.5~1mm的黃、綠色菌落。為有效排除干擾，及時準確地判斷出是否存在弧菌屬細菌，可結合弧菌屬細菌在TCBS培養(yǎng)基上生長的特點：弧菌生長快，菌落大，培養(yǎng)4-5h原劃線處有菌苔生長，8-10h可長出小菌落，16h菌落可達2mm;其他菌在TCBS上則無此特點。因此在篩選弧菌屬細菌的選擇性培養(yǎng)基時要特別注意在確定的培養(yǎng)時間內進行菌落的觀察，時間超過即影響其準確性。
部分弧菌在TCBS培養(yǎng)基上的顏色
圖片來源網(wǎng)絡
廈門敏測實驗器材公司供應以上弧菌檢測實驗器材。
另有弧菌顯色培養(yǎng)基，適用于科研院校等研究機構。
在科瑪嘉弧菌顯色培養(yǎng)基上，霍亂弧菌呈藍色、藍綠色到綠色，副溶血性弧菌呈圓形、半透明、表面光滑的粉紫色；
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改.jpg
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2018-1-5 16:32 上傳
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作者: 肖浩 時間: 2018-1-22 17:04
厲害了，，，學習一下
作者: flyjet 時間: 2020-5-29 14:39
天氣開始轉熱了，微生物生長加快，又要開始檢測弧菌了。
需要弧菌檢測培養(yǎng)基--TCBS培養(yǎng)基可以聯(lián)系我們。
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